1.差(chà)速(sù)離心:逐次(cì)增加離心力,每次(cì)可沉降樣品溶液中的(de)一些組(zǔ)份。
差速離心是一種最常用的方法。在這種方(fāng)法中,離(lí)心管在開始時裝滿了均一的樣(yàng)品溶液。通過在(zài)一定速度(dù)下一定時間的離心後,就可得到(dào)兩個部(bù)份:沉澱和
上清液。
通常在第一次離心時把大部分不需要的大粒子沉降去掉。這時所需(xū)的(de)組份大(dà)部分仍留在上(shàng)清液(yè)中。然後將收集(jí)到的上清液以更(gèng)高速度離心(xīn),把所需的粒子沉積
下來。離心的時間(jiān)要選擇得當,使大部(bù)份不需(xū)要的更小的粒子仍留在上清液中。對於得到的沉(chén)澱和上(shàng)清液可(kě)以進行進(jìn)一(yī)步的離心,直到達到所(suǒ)需要的分(fèn)離純(chún)度為止。
差速(sù)離心(xīn)的(de)特點是操作簡(jiǎn)單,但分離純度不高。
2.密度梯度離心(xīn)法:可以同時使樣品(pǐn)中幾(jǐ)個或(huò)全部組份分離,具有很好的分辨率。
(1)速率區帶法(fǎ):
根據樣品中(zhōng)不同(tóng)粒子所具有的不同(tóng)的尺寸大小及沉降速度(S)。
大致步驟如下:
在離心管中裝入密(mì)度(dù)梯度溶液,溶液的密度從離心管頂部(bù)至底部逐漸(jiàn)增加(正梯(tī)度)。
將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部。樣品在梯度溶液表麵形成(chéng)一負梯度。
由於不同大(dà)小的粒子在離心力作用(yòng)下,在梯度中移動的速度不一樣,所以經過離心後會形成幾條分開的樣品區帶。
樣品粒子的密度必須大於(yú)梯度液注(zhù)中任一點的(de)密度。離心過程必須在區帶到達管子底部前停止。
(2)等密度離心法:
根據粒子的不同密度來分離。離心過程(chéng)中,粒子會移至與它本身密度(dù)相同的地方形成區帶。
密度樣度的選擇要使梯度的範圍包括所有待分離粒子的密度。樣品可以在密度梯度液(yè)粒上麵或均勻分布在(zài)密度梯度中。經離心後,樣品粒子達到(dào)它(tā)們的平衡點。
平衡(héng)後粒子的分離(lí)完全由其密度決定,與時(shí)間無關,此時再改變離心轉速,隻能改變(biàn)區帶的相對位置。